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la suplementación aguda de L-arginina no aumenta la producción de óxido nítrico en los sujetos sanos recibieron 20 de diciembre de 2011 Aceptado: 16 May 2012 Publicado: 12 de Junio ​​de 2012 Los suplementos dietéticos abstractas que contienen L-arginina se han comercializado con el propósito de aumentar la vasodilatación y, por tanto, la sangre y suministro de oxígeno al músculo en ejercicio. En el presente estudio se evaluó el efecto agudo de la suplementación con L-arginina sobre los indicadores de la producción de NO, nitrito (NO 2 -) nitrato (NO 3 -) (NOx), en sujetos sanos. También se han abordado concentraciones plasmáticas de dimetilarginina asimétrica (ADMA) y dimetilarginina simétrica (SDMA). Diecisiete varones sanos participaron en un estudio doble ciego controlado con placebo, aleatorizado,,. Las muestras de sangre fueron extraídas de una vena antecubital izquierda al inicio del estudio (T0). Posteriormente, los sujetos fueron submittedto azar 6 g de la suplementación de L-arginina oral (como hidrocloruro de L-arginina) o placebo (como almidón de maíz) después, los sujetos permanecieron en reposo en posición y muestras de sangre en posición supina fueron elaboradas de nuevo en 30 (T1), 60 (T2), 90 (T3) y 120 minutos (T4) después de la suplementación. Para analizar la producción de NO, NO 3 - se convierte en NO 2 - por la nitrato reductasa, seguido por la derivatización de NO 2 - con 2,3-diamino-naftaleno. NOx, ADMA y SDMA se analizaron utilizando un sistema de cromatografía líquida de alta resolución y controlados con un detector de fluorescencia. ANOVA de dos vías con medidas repetidas no mostró cambios significativos en las concentraciones de NOx en el grupo de L-arginina en comparación con el grupo placebo en cualquiera de los puntos fivetime (T0: 17,6 3,9 vs 14,6 2,3 mol / L T1: 15,8 2,4 vs 14,3 1,7 mol / L T2: 16,8 4,9 13,7 vs 2,7 mol / L T3: 16,7 3,9 14,6 vs 2,1 mol / L T4: 15,1 2,8 13,5 vs 3,5 mol / L). Por otra parte, los niveles plasmáticos de ADMA y SDMA no fueron estadísticamente significativas entre los grupos L-arginina y placebo en T0 (0,43 vs 0,19 0,39 0,15 mol / L y 1,83 vs 1,13 1,70 0,62 mol / L), respectivamente. En conclusión, la suplementación aguda L-arginina no aumenta la concentración plasmática de NOx en individuos sanos con concentraciones de plasma normales de ADMA. Palabras clave Aminoácidos óxido nítrico dimetilarginina asimétrica simétrica dimetilarginina Nitrito Nitrato HPLC Introducción Muchos suplementos se han introducido en el mercado con el propósito de mejorar los atletas de rendimiento 1. La mayoría de estos suplementos supuestamente ayudar a los atletas toleran un mayor grado de entrenamiento pesado, ayudando a los atletas a recuperarse más rápido durante el entrenamiento deportivo intenso 2. Recientemente, se han introducido los suplementos que contienen L-arginina en el mercado que pretenden promover la vasodilatación mediante el aumento de la producción de óxido nítrico (NO) a través de la activación de óxido nítrico sintasa (NOS). Esta vasodilatación favorecería una perfusión aumento, así como un nutriente y oxígeno mayor entrega a los músculos activos durante el ejercicio, la mejora de la síntesis de proteínas y la recuperación muscular 2. L-arginina se considera un aminoácido semi-esencial porque el cuerpo normalmente produce en cantidades suficientes. Sin embargo, la suplementación puede ser necesaria en condiciones especiales, como la malnutrición, la producción excesiva de amoníaco, quemaduras, infecciones, diálisis peritoneal, un rápido crecimiento, trastornos de síntesis de urea, y / o sepsis 3. concentraciones fisiológicas de L-arginina en individuos sanos son suficientes para saturar la NOS endotelial, que es 3 mol / L. Por lo tanto, complementaria L-arginina no debe promover el aumento de la actividad de la enzima en consecuencia, hay más producción de NO debe ocurrir. Sin embargo, hay evidencia que describe los efectos biológicos mediados por NO asociados a la suplementación con L-arginina a pesar del hecho de que el óxido nítrico sintasa (NOS) se satura teóricamente con la concentración fisiológica de L-argininehence la condición conocida como la paradoja L-arginina 4. La evidencia preliminar sugiere que la suplementación con L-arginina puede ayudar a tratar personas con factores de riesgo, tales como la aterosclerosis hipercolesterolemia, la hipertensión, la diabetes mellitus, la insuficiencia renal, la hiperhomocisteinemia, el tabaquismo y agingall de las cuales son las condiciones que se asocian con una reducción de la biosíntesis de NO 5 9. Bger R. 10 había demostrado que los niveles plasmáticos de dimetilarginina asimétrica (ADMA), un inhibidor de NOS endógeno, se incrementan aproximadamente 23 veces en las condiciones fisiopatológicas asociadas con la enfermedad cardiovascular. Por esta razón, elevada concentración de ADMA puede ser una explicación posible para la disfunción endotelial y la disminución de la síntesis de NO en este grupo de enfermedades. Por lo tanto, parece que sólo los sujetos con mala síntesis de NO son susceptibles de beneficiarse de la suplementación con L-arginina. A pesar de la teoría con respecto a la suplementación con L-arginina mejora la vasodilatación del aumento de la producción de NO, una revisión reciente 2 sobre el efecto ergogénico de la suplementación con L-arginina en sujetos sanos muestra que sólo había cinco estudios que evaluaron el rendimiento del ejercicio después de la suplementación con L-arginina aguda, tres de los cuales reportado mejoras significativas. Además de las mejoras observadas en el rendimiento físico, los autores de estos estudios no midieron el mecanismo subyacente que podría explicar cómo los resultados obtenidos puede haberse debido a un aumento de la producción de NO. Bailey et al. 11 observaron aumentos significativos en el tiempo hasta el agotamiento con reducciones concomitantes en el costo de O2 de ejercicio del ciclo de intensidad moderada y lenta amplitud componente de consumo de oxígeno en el grupo suplementado con 6 g de L-arginina, 1 h antes de una serie de moderada y severa intensidad series de ejercicios durante 3 días. Stevens et al. 12 observó aumento significativo de par máximo, el trabajo total y el índice de fatiga después de la suplementación con un producto que contiene 6 g de L-arginina en tres alícuotas iguales a los 45, 30 y 10 min antes del ejercicio períodos dinamómetro isocinético. Buford y Koch, 13 observaron una mejora significativa de la potencia media durante series repetidas de ejercicio supra-máxima durante cicloergómetro en el grupo que consumió 6 g de L-arginina. Con base en la teoría de que las concentraciones fisiológicas de L-arginina son suficientes para saturar la NOS endotelial y no hay más producción de NO deben ocurrir en individuos sanos, es nuestra hipótesis de que no debe haber concentración cambios inplasma de NO 2 - y NO 3 - como una resultado de la suplementación de L-arginina en comparación con placebo. Debido al hecho de que otros estudios han demostrado vascular y ventajas de rendimiento de ejercicio después de la suplementación con L-arginina en individuos sanos 2. 14, aún queda la pregunta de si este efecto es mediado-NO. Por lo tanto, con el fin de probar la aseveración de que la suplementación con L-arginina puede aumentar la síntesis de NO, se realizó el presente estudio para identificar los efectos agudos de la suplementación con L-arginina en marcadores indirectos de NO synthesisNO 2 - y NO 3 -. Es de señalar que, contrariamente al presente estudio, otros estudios en animalesde evaluó el efecto de la suplementación con L-arginina en la síntesis de NO en reposo tienen limitaciones metodológicas 15 (por ejemplo, no controlaron la dieta de alimentos no contienen 2 - y NO 3 -) , lo que puede causar defectos en los resultados. También se han abordado los niveles en plasma de ADMA y SDMA en el inicio del estudio. Métodos Temas Diecisiete varones sanos (25,5 3,5 78,7 años, 10,5 kg 176,1 7,5 cm y 25,3 2,3 kg. m-2 IMC) fueron reclutados para participar en el estudio. Todos los sujetos fueron informados plenamente de la naturaleza y el propósito de la investigación y dieron su consentimiento por escrito para participar. Los criterios de exclusión para la participación en el estudio fueron cualquier cardiovascular conocida, pulmonar o enfermedades metabólicas (asma, diabetes, hipertensión, dislipidemia, etc.), y el uso de ergogénicos nutricionales y farmacológicas. Todos los procedimientos experimentales se realizaron de acuerdo con las normas éticas de la Declaración de Helsinki y fue aprobado por el Comité Institucional de Ética del Hospital Clementino Fraga Filho Universitrio (protocolo 0118.0.197.000-10) de Río de Janeiro, Brasil. Diseño experimental En un estudio aleatorizado, doble ciego y controlado con placebo, los sujetos informaron al laboratorio. Las muestras de sangre fueron extraídas de una vena del antebrazo antecubital al inicio del estudio después de un período de diez minutos de descanso tranquilo en posición supina. Posteriormente, los sujetos fueron divididos al azar en cualquiera de un grupo L-arginina o placebo y se posaron de nuevo en posición supina en una habitación tranquila. Las muestras de sangre se extrajeron de nuevo en 30 (T0), 60 (T1), 90 (T2) y 120 minutos (T4) después de la suplementación (véase la Figura 1). Durante este período, los sujetos consumieron ningún alimento y la bebida. Resumen de diseño experimental. El control dietético Un día antes de realizar el estudio, los sujetos fueron orientada como al NO 2 - y NO 3 - contenido de los alimentos y se pidió a restringir sus dietas de alimentos ricos en NO 2 - y NO 3 -. Una lista que describe los alimentos y grupos de alimentos que deben evitarse y que se prefiere se distribuyó a los sujetos, con el fin de simplificar sus opciones dietéticas para la baja de NO 2 - y NO 3 - alimentos para el período de 24 horas antes del estudio. En resumen, se informó a los sujetos para evitar productos de origen vegetal, como las espinacas y calabaza, que contienen las cantidades más altas de NO 3 - por porción. Dulces, frutos secos, grasas y aceites contienen muy poca NO3 - por porción y por lo tanto se les permitió. La carne roja (ternera, cerdo, cordero, carne de cordero, y el hígado) y frijol productos contienen las cantidades más altas de NO 2 - dietética por porción y se querían evitar. fuentes insignificantes de la dieta NO 2 - se encuentran en el queso cottage, grasas como la mantequilla o margarina, y varios zumos de frutas. Esta orientación de la dieta se basa en una lista desarrollada para las estimaciones de la dieta NO 2 - y NO 3 - 16. La adherencia a la dieta fue controlada por el recuerdo de veinticuatro horas realizada a su llegada para el estudio, en el que cada sujeto fue interrogado en cuanto a su ingesta alimentaria para el período de 24 horas antes de la llegada para el estudio. Un análisis más detallado de la ingesta de energía y macronutrientes (como porcentaje de la energía total) a partir de la retirada de veinticuatro horas de cada sujeto de ambos grupos L-arginina y placebo se llevó a cabo mediante el uso de un programa de software de análisis de la nutrición (dietWin Professional 2008 para las ventanas, versión 2.0, Porto Alegre, RS, Brasil). Suplementación Diez minutos después de la muestra de sangre de referencia, todos los sujetos se les administró por vía oral ya sea 6 g de clorhidrato de encapsulado de L-arginina o placebo (como almidón de maíz) en formas idénticas con 400 ml de H 2 O Milli-Q de una manera doble ciego y aleatorio . Elegimos para proporcionar 6 g de L-arginina, ya que tal dosis se tolera bien cuando se consume por vía oral, y se informó que aumentar la vasodilatación 17. La producción de óxido nítrico se extrajo sangre de las venas antecubital y se recoge en tubos que contienen EDTA, y después se centrifugó inmediatamente a 3000 g durante 10 min a 4 ° C con el fin de separar el plasma, antes de almacenarlo a 80ºC para su posterior análisis. La producción de NO se ensayó midiendo plasma NO 2 - NO 3 - (NOx) como se ha descrito previamente por Li et al. 18. En resumen, se diluyó plasma en una proporción de 1:10 y 1: 100 con el fin de analizar NO 2 - y NO 3 -. respectivamente. Después de la dilución, 1 ml de cada muestra se filtraron utilizando un ultrafiltro de corte 10-kDa (Vivaspin 2, GE Healthcare) a 14.000 g durante 15 min para eliminar las proteínas de alto peso molecular. NO 3 - se convirtió en NO 2 - enzimáticamente por la nitrato reductasa EC 1.6.6.2 (Roche Diagnostics, Mannheim, Alemania) a partir de especies de Aspergillus. La solución, que consistía en 200 L de muestra, 120 M NADPH y FAD 2 M, se incubó a temperatura ambiente durante 1 h. Después de la conversión de NO 3 - en NO 2 -. la muestra se incubó a 24ºC con 316 mM 2,3-diamino-naftaleno para convertir NO 2 - en el altamente fluorescente 2,3-naftotriazol seguido de la adición de NaOH 2,8 M e inmediatamente se analizó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). El dispositivo de HPLC estaba equipado con una 5-m de fase inversa C8 columna Descubrimiento (150 x 4,6 mm, ID) guardado por un 40-m de fase inversa C18 columna de seguridad Ascentis (50 x 4,6 mm, ID) y un modelo de detector de fluorescencia RF-10AXL (Shimadzu) el seguimiento de excitación y de emisión en longitudes de onda 375 nm y 415 nm, respectivamente. Ambas columnas se obtuvieron de Supelco (Bellefonte, PA, EE. UU.). La fase móvil (1.0 mL / min) era tampón de 15 mM de fosfato de sodio (pH 7,5) y metanol. La oxidación de NO a través de varias reacciones metabólicas da lugar a la formación de nitrito (NO 2 -) y nitrato (NO 3 -) como los dos productos finales principales 19. El producto de oxidación principal de la síntesis de NO en soluciones acuosas (en ausencia de los componentes biológicos, tales como hemoproteínas) es NO 2 -. La oxidación adicional de NO 3 - requiere la presencia de especies oxidantes adicionales tales como oxyhemoproteins 20. Por ejemplo, el NO se oxida rápidamente a NO 2 - a través de la auto-oxidación en soluciones acuosas, tales como fluidos biológicos, y puede reaccionar con aniones superóxido para producir peroxinitritos. En presencia de grupos hemo en las proteínas tales como la hemoglobina y la mioglobina, NO reacciona con la oxihemoglobina para producir metahemoglobina y NO 3 -. Por lo tanto, la medición de NO 2 - y NO 3 - en diversos fluidos biológicos resultó ser el método no invasivo más adecuado, práctico y fiable para evaluar la síntesis de NO sistémica in vivo 19. aminoácidos de plasma se analizaron los aminoácidos L-arginina, L-citrulina y L-ornitina como se ha descrito previamente por Wu y Meininger 21. En resumen, 50 L de plasma se mezcló con 50 l de ácido perclórico 1,5 M (v / v) para eliminar las proteínas. Después de 2 min a temperatura ambiente, 1,125 ml de H2O y 25 L se le añadió carbonato de potasio. Los tubos se centrifugaron a 10.000 g durante 2 min. La muestra (25 L) se mezcló con 25 L de la o-ftaldialdehído (OPA) reactivo solución (v / v) durante 1 min. La solución derivatizada se analizó inmediatamente por HPLC. El dispositivo de HPLC estaba equipado con un 3-m de fase inversa C18 columna Kromasil (150 x 4.6 mm, ID) guardado por un 40-m de fase inversa columna de guarda C18 Ascentis (50 x 4.6 mm, ID) y un detector de fluorescencia modelo RF-10AXL (Shimadzu) monitoreo excitación y de emisión a 340 nm y 455 nm, respectivamente. Estos métodos cromatográficos son muy sensibles, específicas y precisa, así como proporcionan una herramienta útil para el estudio de la vía L-arginineNO. Se analizaron de ADMA y SDMA de análisis Las concentraciones plasmáticas de ADMA y SDMA como se ha descrito previamente por Wu y Meininger 21. En resumen, 200 L de plasma se mezcló con 100 l de ácido perclórico 1,5 M (v / v) para eliminar las proteínas, seguido de 50 L de 2 M de carbonato de potasio y 700 L de tampón de fosfato (pH 7,0). La solución entera se cargó en una columna de extracción en fase sólida (Oasis MCX) y el disolvente de elución se eliminó utilizando un sistema de muestra concentrador (Savant SpeedVac Concentrator, Thermo Fisher Scientific Inc.). Los residuos se suspendieron en 200 L se mezcló con 15 L del reactivo OPA (v / v) durante 1 min H 2 O. La muestra (15 L). La solución derivatizada se analizó inmediatamente por HPLC. El dispositivo de HPLC estaba equipado con una columna Nucleosil 1005 C6H5 (250 x 4,6 mm, I. D Manchery Nagel, Easton, PA) y una fluorescencia modelo de detector de RF-10AXL (Shimadzu) monitoreados de excitación y emisión longitudes de onda a 340 nm y 455 nm, respectivamente. Todos los procedimientos cromatográficos se realizaron a temperatura ambiente. Se utilizó el análisis estadístico Se realizó un ANOVA de dos vías con medidas repetidas en dos factores (2 x 5 x grupo de tiempo) para identificar diferencias en NOx y aminoácidos en plasma en cada punto de tiempo. Cálculo del área de concentración de NOx plasma integrada bajo la curva (AUC) se determinó mediante el uso de un método trapezoidal (línea de base concentración de NOx: y 0). Unpaired t de Student-test se utilizó para identificar las diferencias en las concentraciones plasmáticas de ADMA, SDMA y la relación / ADMA L-arginina en el inicio del estudio. La significación estadística se fijó en el nivel de confianza de 0,05. Todos los análisis se realizaron utilizando GraphPad Prism versión 5.00 para Windows (GraphPad Software, San Diego, California, EE. UU.). Resultados Características de los sujetos Al inicio del estudio, no hubo diferencias significativas entre el grupo placebo frente a los grupos asignados al azar de L-arginina con respecto a la edad, altura, peso corporal, índice de masa corporal, la grasa corporal (ver Tabla 1). Temas características basales Los valores son media ± desviación estándar. L-Arg L-arginina grupo suplementado grupo Placebo Pla. El control dietético Sobre la base de la evaluación de la retirada de veinticuatro horas, todos los sujetos de los grupos tanto de la L-arginina y de placebo al parecer había adherido a la orientación dietética y evitar todos los alimentos que se enumeran en lo más alto de NO 2 - y NO 3 -. No hubo diferencia significativa en la ingesta de energía y el porcentaje de macronutrientes antes de las 24 h de comenzar el estudio entre los grupos de L-arginina y placebo (2,663 508,5 vs 2.905 641,6 kcal 52,9 6,3 vs 53,6 5,8 hidratos de carbono 21,6 4,8 vs 21,7 5,1 proteína 25,5 7,9 vs 24,7 6,4 grasa). producción de óxido nítrico plasma NO 2 - NO 3 - (NOx) las concentraciones en cada punto de tiempo se representan en la Figura 2. No se encontraron diferencias significativas entre los grupos en cualquier punto del tiempo. La Figura 3 presenta los datos para el total integrado NOx AUC durante el periodo de suplementación poste 120 min. Las AUC integrada reveló que a pesar de un 15 superior, la suplementación con L-arginina no se tradujo en una mayor respuesta de NOx que en el grupo placebo a lo largo del tiempo (P 0,05). Las concentraciones plasmáticas de NOx (mol / L). No se observó ningún cambio significativo entre los grupos en cualquier punto de tiempo. L-Arg L-arginina grupo suplementado grupo Placebo Pla. El área total de NOx integrada bajo la curva durante el período de suplementación puesto 120 min. No se observó ningún cambio significativo entre los grupos en el tiempo. L-Arg L-arginina grupo suplementado grupo Placebo Pla. Plasma amino ácidos las concentraciones plasmáticas de L-arginina, L-citrulina y L-ornitina en cada punto de tiempo se representan en la Tabla 2. No hubo diferencias significativas entre los grupos se observó en la línea base. Plasma L-arginina aumentó significativamente en 30 min (209,9 39,1 vs 123,3 44,6 mol / L, P 0,01) después de la suplementación en el grupo de L-arginina, en comparación con el grupo placebo (véase la Figura 4). No se observó ningún cambio significativo entre los grupos en plasma de L-citrulina y L-ornitina en cualquier punto de tiempo. Los valores de amino ácidos plasma (mol / l) a 10, 30, 60, 90 y 120 minutos después de la administración de suplementos Los valores son la desviación estándar media. Los símbolos (P Pla Placebo grupo. La concentración en plasma de L-arginina. Los símbolos (P Pla Placebo grupo. Plasma ADMA y SDMA En el inicio del estudio, no hubo diferencias significativas en los niveles en plasma de ADMA, SDMA y L-arginina relación / ADMA entre el grupo placebo frente a los grupos asignados al azar de L-arginina (0,43 vs 0,19 0,39 0,15 mol / L y 1,83 vs 1,13 1,70 0,62 mol / L) (ver Tabla 1). Discusión suplementos dietéticos que contienen el aminoácido semi-esencial L - arginina (el único sustrato de la nOS) se han introducido en el mercado, reclamando para promover la vasodilatación mediante el aumento de la producción de nO. en el presente estudio, se encontró que en los sujetos sanos de 6 g de la suplementación con L-arginina oral no fomenten un aumento del la producción de nO en comparación con el grupo placebo. Además, no se observaron incrementos significativos en el plasma L-citrulina, que es el subproducto de la síntesis de nO a partir de L-arginina. por otra parte, no hay diferencias significativas en las concentraciones plasmáticas de ADMA y SDMA en inicio del estudio se observaron entre los grupos de L-arginina y de placebo. Varios estudios habían mostrado ninguna diferencia significativa en la producción de NO (medida por NO 2 - y NO 3 -) después de la suplementación de L-arginina 22 24. Liu et al. 22 No se observó ninguna diferencia significativa en el plasma NO 2 - y NO 3 - concentraciones después de que complementa de forma oral diez atletas varones sanos con 6 g de L-arginina (como forma libre) o placebo durante 3 días. Koppo et al. 23 observó ninguna diferencia significativa en NO urinario 2 - y NO 3 - después de 14 días de complementar siete hombres sanos físicamente activos con 7,2 g de hidrocloruro de L-arginina (3 3 cápsulas de 805 mg), y Tang et al. 24 También, no se encontraron diferencias significativas en la síntesis de NO (medido por el plasma NO 2 - y NO 3 -) de cada ocho hombres jóvenes sanos después de una dosis única de 10 g de L-arginina. Dado que todos los sujetos de estos estudios se presentaron para hacer ejercicio, los resultados de estos estudios no son sorprendentes debido a la propia naturaleza de los mecanismos subyacentes de la síntesis de NO: tensión de cizallamiento vascular es considerado el principal estímulo para la producción de NO endotelial durante el ejercicio 25. Por lo tanto, no debería ser teóricamente no hay necesidad de suplementario L-arginina para sintetizar NO durante el ejercicio. Con respecto a estudios en la condición de reposo, Blum et al. 26 investigaron los efectos de la L-arginina oral (9 g al día durante un mes) en la bioactividad de cada 10 mujeres posmenopáusicas sanas. Después del periodo de suplementación, los autores observaron diferencias significativas en el suero de NO 2 - y NO 3 - concentraciones. En otro estudio, Evans et al. 27 Tampoco se encontraron diferencias significativas en el suero NO 2 - y NO 3 - concentraciones después de la presentación de doce sujetos sanos a tomar L-arginina por períodos de 1 semana a dosis diarias de 3, 9, 21, y 30 g. Schwedhelm et al. 28 publicaron un estudio con el fin de investigar las propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas de comunicación oral L-arginina con respecto al metabolismo del NO. Veinte sujetos sanos fueron sometidos a dos dosis de la suplementación con L-arginina (1 g de tiempos de árboles de liberación sostenida de arginina por día o 1,6 g de arginina de liberación inmediata dos veces al día) durante 7 días. Al inicio del estudio y en el día 7, una sola dosis de la suplementación con L-arginina (la mitad de la dosis diaria total, respectivamente) se administró y las muestras de sangre fueron extraídas a los 0, 0,5, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 , 16 y 24 h después de la suplementación. Los autores observaron diferencias significativas en la excreción urinaria de nitratos en cualquier punto de tiempo, a pesar de los aumentos en las concentraciones plasmáticas de L-arginina después de la suplementación (T max 3.7 1.3 h para la arginina de liberación sostenida y 0.7 0.1 h para la arginina de liberación inmediata). En el presente estudio, las concentraciones de L-arginina en plasma aumentaron significativamente después de 30 minutos de la suplementación con L-arginina en comparación con el grupo placebo, y se mantienen altos durante todo el período de estudio. Además, no se observaron diferencias significativas en las concentraciones plasmáticas de L-ornitina y L-citrulina en cualquier punto de tiempo entre los grupos. Es importante señalar que, contrariamente a la presente estudio, ninguno de los estudios anteriormente mencionados controlados de la ingesta de alimento rico en NO 2 - y NO 3 - de sujetos dieta antes o durante el estudio. La mayoría de NO 2 - y NO 3 - proviene de la dieta (productos vegetales contienen los más altos niveles de NO 3 - carne y frijol productos contienen los más altos niveles de NO 2 -), lo que puede alterar los resultados de los análisis. Por lo tanto, la síntesis endógena de NO no se puede medir de manera adecuada por el NO 2 - y NO 3 - en plasma y orina si la dieta no se controla. Medición de NO 2 - y NO 3 - en diversos fluidos biológicos resultó ser el método no invasivo más adecuado, práctico y fiable para evaluar la síntesis de NO sistémica in vivo 19. En el presente estudio, la síntesis de NO se cuantificó mediante la medición de plasma NO 2 - NO 3 - (NOx) mediante cromatografía líquida de alta resolución. La mayoría de los estudios 22 24 analizó la síntesis de NO mediante reacción de Griess. Las condiciones ácidas en las que se llevaron a cabo experimentos usando la reacción de Griess favorecen la formación de compuestos de S-nitroso de NO 2 - y tioles reducidos. Por lo tanto, la medición de NO 2 - y NO 3 - en fluidos biológicos mediante ensayos basados ​​en la Griess está sujeta a interferencias por muchas sustancias que actúan en diferentes lugares en la reacción de Griess y la siguiente medición espectrofotométrica de la misma longitud de onda (absorbancia normal en 540 Nuevo Méjico). Por lo tanto, los estudios que utilizan la reacción de Griess para detectar metabolitos estables (NO 2 - y NO 3 -) para medir la síntesis de NO pueden tener limitaciones metodológicas significativas, en comparación con las técnicas de fluorométricos asociados con HPLC. Bailey et al. 11 observaron aumentos significativos en el plasma NO 2 - después de que complementa nueve hombres recreativa activos sanos con un suplemento que contenía 6 g de L-arginina (disuelto en 500 ml de agua) en comparación con placebo. Es importante señalar que este estudio asocia otros aminoácidos además de L-arginina, incluyendo L-citrulina (cantidades que no expresan en el estudio), que se ha demostrado que aumentar la producción de NO, tal como se mide por las concentraciones en plasma de NO 2 - 29 y la excreción urinaria de NO 3 - 28 y GMPc. Curiosamente, los autores no midieron en plasma NO 2 - al inicio del estudio que acababan de hacer así que 1 hora después de la administración de suplementos, que es una limitación metodológica importante, ya que no se sabe si había alguna diferencia en las muestras antes de la suplementación. Por otra parte, teniendo en cuenta que la dieta puede influir en las concentraciones plasmáticas de nitrito, sin control de la dieta para limitar el consumo de alimentos ricos en NO 2 - y NO 3 - se llevó a cabo. Otros estudios también han mostrado mejoras en la producción de NO mediante el uso de la suplementación con L-arginina 30 33. Sin embargo, todos estos estudios se había administrado la L-arginina en sujetos con algunos factores de riesgo cardiovascular o cardiopatía. Parece que la L-arginina es un factor limitante para la síntesis de NO en pacientes con riesgo para la aterosclerosis, pero no para los individuos sanos 34. Por lo tanto, la suplementación con L-arginina puede ser necesario sólo para los individuos con factores de riesgo aterosclerosis. Entre las posibles explicaciones de este fenómeno es la presencia de altos niveles de dimetilarginina asimétrica (ADMA), un inhibidor de NOS endógeno. Mayores concentraciones de ADMA se encontraron en los individuos con la aterosclerosis, así como en individuos con factores de riesgo de aterosclerosis, tales como la hipercolesterolemia, la hipertensión, la diabetes mellitus, insuficiencia renal, la hiperhomocisteinemia, el tabaquismo y el envejecimiento 10. niveles fisiológicos de L-arginina y la presencia de concentraciones normales de ADMA saturan la enzima NOS endotelial, promoviendo la producción de NO. En estas condiciones, la suplementación de L-arginina no afecta a la actividad enzimática. Por el contrario, en presencia de las concentraciones plasmáticas elevadas de ADMA la actividad de la NOS endotelial disminuye, resultando en niveles fisiológicos más bajos de producción de NO. SDMA no tiene efecto en la actividad de NOS, pero puede competir con L-arginina por el sistema de transporte y 35. En estas condiciones, la suplementación de L-arginina puede volver a establecer la relación / ADMA L-arginina con el fin de activar la NOS endotelial 4. Por lo tanto, la suplementación de L-arginina puede ejercer un efecto beneficioso sobre la función vascular. En el presente estudio, se observó ninguna diferencia significativa en las concentraciones plasmáticas de ADMA, SDMA y la relación / ADMA L-arginina al inicio del estudio entre los grupos. Este hallazgo podría explicar la ausencia de cambios significativos en la producción de NO después de la suplementación con L-arginina. Las concentraciones plasmáticas de ADMA basal observada en el presente estudio son similares a estudios previos en sujetos sanos que informaron concentraciones de ADMA que oscilan entre 0,3 y 0,9 mol / L 36 de 38. Por lo tanto, se puede especular que no debe haber ningún aumento adicional en la producción de NO después de la suplementación de L-arginina en sujetos con niveles normales de ADMA. Bger et al. 34 observó que los niveles de ADMA en plasma fueron significativamente mayores en sujetos hipercolesterolémicos que en los sujetos de control (normocolesterolémicos 2,17 0,15 y 1,03 0,09 mol / L, respectivamente) y los niveles más altos de ADMA se asoció con una reducción de la síntesis de NO. Por lo tanto, parece que las concentraciones de ADMA en plasma altos pueden inhibir la enzima NOS, pero concentraciones bajas o normales de ADMA en plasma no afectar la síntesis de NO. En conclusión, la suplementación de L-arginina no aumenta la producción de NO en sujetos sanos con concentraciones normales de ADMA en plasma. Por lo tanto, no es aconsejable para recomendar suplementos dietéticos que contienen L-arginina a los efectos de increasingacutely la producción de NO en sujetos sanos. Este resultado no descarta el posible efecto de la L-arginina en la producción de NO en los individuos con pathophysiologicalconditions (por ejemplo, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la diabetes mellitus, la insuficiencia renal, la hiperhomocisteinemia, el tabaquismo y el envejecimiento) y estudios a largo plazo son necesarios para identificar si la L-arginina puede proporcionar algún beneficio. Abreviaturas nítrico sintasa de óxido Conflicto de intereses Cada autor certifica que él o ella no tiene asociaciones comerciales (por ejemplo, consultorías, acciones, intereses de capital, acuerdos de patentes / licencias, etc.) que puedan suponer un conflicto de intereses en relación con el artículo presentado, excepto como se describe en un anexo separado. Todas las fuentes de financiación que apoyan el trabajo y todas las afiliaciones institucionales o corporativas de los autores son reconocidos en una nota en el trabajo. Autores de las contribuciones TSA contribuyeron sustancialmente a la adquisición de datos y el análisis cromatográfico, análisis estadístico e interpretación de datos, y fue el escritor manuscrito. CACJ contribuyó sustancialmente al análisis cromatográfico, la interpretación de los resultados y la revisión del manuscrito. JTS contribuido a la interpretación de datos originales y de revisión. VMFP contribuido a la interpretación de datos originales y de revisión. Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito final. Autores afiliaciones Laboratorio de Análisis Avanzado de Bioquímica y Biología Molecular, Departamento de Bioquímica, Instituto de Química de la Universidad Federal de Río de Janeiro Laboratrio de Anlises Avanadas em Bioqumica correo Biología Molecular, Departamento de Bioqumica Instituto de Qumica, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Avenida Athos da Silveira Ramos Referencias Kreider RB, Wilborn CD, Taylor L, Campbell B, Almada AL, Collins R, Cooke M, Earnest CP, Greenwood M, Kalman DS, Kerksick CM, Kleiner SM, Leutholtz B, López H, Lowery LM, Mendel R, Smith A, Spano M, R Wildman, Willoughby DS, Ziegenfuss TN, Antonio J: Recomendaciones ISSN ejercicio. Int J Nutr Soc Deportes. 2010, 7: 7 a 10,1186 / 1550-2783-7-7. Ver el artículo Alvares TS, CM Meirelles, Bhambhani YN, Paschoalin VM, Gomes PS: L-arginina como una ayuda potencial ergogénico en sujetos sanos. Sports Med. 2011, 41 (3): 233-248. 10.2165 / 11538590-000000000-00000. 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